السيرولوجي و فحص وتشخيص فيروسات النبات

السيرولوجي و فحص وتشخيص فيروسات النبات

---------------

حمل من هنا
SEROLOGY_MAK.pdf

-------------------

------------------------------------

------------------------

الطرق السيرولوجية لفحص وتشخيص فيروسات النبات
إعداد م محمود عقيلان

علم السيرولوجي ببساطة هو العلم الذي يدرس الانتيجين و الانتيبودي والتفاعلات الحادثة بينهما
الانتيجين والهابتين ANTIGEN - HAPTEN
الانتيجين عبارة عن مادة بروتينية تؤدي الى انتاج اجسام مضادة في جسم الحيوان المحقون بها كما انها لها القدرة على التفاعل معه وهي تحوي البروتين وعديدات التسكر والدهون وغيرها
اما الهابتين فهولا يكون اجسام مضادة عند حقنه ولكنه له نشاط سيرولوجي في انبوب الاختبار ومنه نوعان هابتين معقد وهابتين بسيط المعقد له القدرة على الاتحاد مع الاجسام المضادة و تعطي راسب او تفاعل جزئي اما البسيط فلا يكون راسب بل يمنع الترسيب باتحاده مع الجسم المضاد

القدرة الانتيجينية للفيروس النباتي :
يعتبر البروتين وخاصة المنطقة الخارجية منه هو الجزء النشط انتيجينيا اما الحامض النووي فربما يزيد القدرة على انتاج الاجسام المضادة

الاجسام المضادة ANTIBODIES
جلوبيولينات خاصة مناعية IMMUNOGLOBULIN أي تتفاعل مع الانتيجين واهمها والاكثر استخداما هو من طراز جاما أي IGG

الاختبارات السيرولوجية : واهم هذه الطرق ما يلي /

1- اختبار التجمع: Agglutination Test

2- اختبار الترسيب Precipitation Test
أ- الترسيب في الأنابيب Tube Precipitation Test.
ب- الترسيب الدقيق Micro Precipitation Test.

3- الانتشار المزدوج في الأجار Agar Double Diffusion Test

4- ELISA : Enzyme linked Immunosorbent Assayطريقة الإنزيم المرتبط.
و هي الطريقة الاحدث والاحسن لما يلي:
• اكثر حساسية من كل الطرق السيرولوجية السابقة حيث يتم باستخدامها الكشف عن الفيروسات الموجودة بتركيز صغير او منخفض في النبات المصاب
• تتم العملية باستخدام كمية صغيرة جدا من الانتيبودي
• سهل الاجراء رغم خطواته العديده
• يمكن ان يتم الفحص على عدد كبير من العينات وسوف اشرح عنها فيما بعد

5 – الكشف سيرولوجيا باستخدام الميكروسكوب الالكتروني :

و الطرق السيرولوجية عموما لها ميزات عديدة اهمها
• يمكننا الاحتفاظ بالاجسام المضادة لفترات طويلة حيث يمكننا الاحتفاظ به لمدة عام في الثلاجة العادية
• يمكننا الكشف عن المرض قبل ظهور اعراضه
• يمكننا من دراسة العلاقات الانتيجينية بين الفيروسات والعزلات المختلفة وهذا يفيد في تقسيم الفيروسات
• يفيد في تقدير كمية البروتين النووي او البروتين
• تعيين موقع الفيروس في انسجة النبات

تحضير الانتيسيرم:
يجب اولا تحضير الفيروس بصورة نقية او نقية جزئيا اذا لم نتمكن بسبب عدم ثبات الانتيجين وفي الحالة الاولى يكون المصل نقي من الاجسام الشاذة اما في الحالة الثانية فانه يتم ترسيب الاجسام الشاذة باضافة عصير من نبات سليم ويمكن استخدام كل الحيوانات لكن الارنب الاوروبي هو الاكثر استخداما عند عمر 3 – 6 اشهر خلال اسبوع حيث يزيد التركيز TITRE لعدة ايام ثم يبدا في التناقص وعند الحقن مرة اخرى فان الفترة اللزمة تقل ويزيد تركيز الاجسام المضادة وتختلف الامينوجينات في قدرتها المناعية او انتاجها للاجسام المضادة ولكنها جميعا اكثر قدرة من البريتينات الاخرى الموجودة في النبات

طرق الحقن :
1 – الحقن في الوريد

2 - الحقن تحت الجلد

3 – الحقن في العضل

4 – الحقن المباشر في العقد الليمفاوية

وتصل الاجسام المضادة الى اعلى تركيز لها بعد 14 يوم في حالة الحقن بالوريد اما في حالة الحقن تحت الجلد او العضل فالفترة تكون 4 – 8 اسابيع وقد وجد ان تقسيم الجرعة وزيادة مرات الحقن تعطي تركيز اكبر من الانتيبودي

عملية الفصد
تتم عملية الفصد لجمع الدم باستخدام اداة حادة و قطع الوريد في الاذن الاخرى من منطقته السفلية او يذبح الارنب لاخذ كل دمه بثقب القلب او من الشريان و يتم جمع الدم على جدران الانابيب برفق حتى لا تتكسر الكرات و يتلون المصل بالاحمر ثم تترك حتى يتخثر ثم يزال برفق ويؤخذ المصل المتبقي وتجرى له عملية طرد مركزي حتى نحصل على الانتيسيرم الاصفر الرائق ويتم تخزينه في انابيب صغيرة حوالي 5 مل ويتم اضافة مادة حافظة مثل ازيد الصوديوم 0.2 % او الجلسرول 50 % ح/و ويتم تجميد او تجفيد الامصال كي نحافظ عليها لفترة طويلة .
للاستزادة حمل الملف السابق
--------------------------------------------------------