شاهد بالفيديو على اليوتيوب خطوات تشخيص مرض الترستيزا

مرض الترستيزا في الحمضيات او الموالح

من المعروف ان مرض الترستيزا من الامراض الهامة جدا على الحمضيات والتي يؤدي الى تدمير الشجرة نهائيا وللاستزادة عن هذا المرض الفيروسي يمكنك الذهاب الى هذه الصفحة من هنا
وقد قمنا بفضل الله وتكاتف جميع العاملين في وقاية النبات بتخفيض نسبته الى صفر % في الامهات في المشاتل و نامل ان نصل الى نسبة ممائلة في الاشتال اللبنة الاساسية للحمضيات او الموالح
وقد تم تصوير خطوات فحص وتشخيص المرض في مختبر الفيروسات التابع لوزارة الزراعة الفلسطينية كي يتسنى للجميع مشاهدة ذلك

الخطوات بالصوت والصورة

خطوات اجراء فحص الاليزا لمرض الترستيزا في الحمضيات

اولا التغطية او الكوتنق /

1- يتم تحضير محلول التغطية او الانتيبودي بعد حساب الكميات اللازمة
أ-يتم تحضير بفر الكوتنق او التغطية اللازم لخلط كمية الانتبودي اللازمة للفحص

ب-يتم اضافة الانتبودي اللازم لتغطية عيون طبق الاليزا

ج-يتم خلط مركز الانتبودي مع بفر التغطية للحصول على محلول التغطية

2- يتم وضع محلول الانتيبودي في طبق الاليزا

3- يتم تغطية طبق الاليزا بالبارافيلم

4- يتم وضع الطبق داخل صندوق التحضين بعد تبليله بالماء

5- بعد انقضاء مدة التحضين يتم عمل غسيل للطبق للتخلص من الانتبودي الزائد والغسيل يكرر في كل الخطوات التالية

يتبع باقي الخطوات ان شاء الله

ثانيا / العينات
حيث يتم تحضير العينات المعدة للفحص وذلك بخلطها بمحلول الاستخلاص وطحنها واخذ المحلول الناتج ووضعه في العيون التي تم تغطيتها بالانتيبودي ثم تحضينها في الثلاجة لليوم التالي
الخطوات/
1- يتم وزن المواد اللازمة لعمل محلول الاستخلاص

2- يتم خلط الكميات اللازمة لمحلول الاستخلاص

3- يتم تقطيع لحاء العينات المراد فحصها

4- يتم وزن 0.3 جم من لحاء العينة المقطعة

5- يتم رص العينات الموزونة حسب الارقام المتسلسة

-6يتم وضع 1ملم من محلول الاستخلاص الذي تم تحضيره في البداية لكل عينة تم وزنها

7- يتم طحن العينات مع محلول الاستخلاص

8- يتم وضع 2ملم اخرى من محلول الاستخلاص لكل عينة مطحونة

9- يتم وضع العينات حسب التخطيط المعد لطبق الاليزا

10- يتم تغطية الطبق ووضعة في الثلاجة لليوم التالي

11- في اليوم التالي بعد انتهاء فترة التحضين يتم عمل غسيل للطبق كما سبق

يتبع باقي الخطوات ان شاء الله

ثالثا/ الكونجغيت
حيث يتم وضع محلول الكونجغيت في طبق الاليزا بعد غسله والكنجغيت عبارة عن انيبودي مرتبط بانزيم الفوسفاتيز

الخطوات /

1- يتم وزن المواد اللازمة لبفر للكنجغيت

2- يتم تحضير بفر الكنجغيت

3- تم اضافة الانتيبودي وانزيم الفوسفاتيز لربطهما معا وتكوين محلول الكونجغيت

4- يتم خلط مواد الكونجغيت مع البفر لتكوين محلول الكنجغيت

5- يتم وضع محلول الكونجغيت في عيون طبق الاليزا الذي تم غسله من مستخلص العينات

6- يتم تغطية الطبق بالبارافيلم ووضعه في صندوق التحضين المرطب بالماء كما سبق

7- يتم غسيل الطبق كما سبق فيصبح جاهزا للخطوة الرابعة

يتبع ان شاء الله

رابعا/ السبستريت
السبستريت هي مادة التفاعل او مادة فعل الانزيم حيث يقوم انزيم الفوسفاتيز بتحليلها فتعطي لون اصفر واللون الاصفر يعني ان العينة مصابة اما اذا ظلت العين بدون لون فهذا يعني ان العينة سليمة ومادة التفاعل يرمز لها ب PNP وهي اختصار ل p-Nitrophenyl phosphate

الخطوات :

1يتم تحضير بفر السبستريت

2يتم خلط مواد بفر السبستريت

3يتم وضع حبة السبستريت على البفر واذابتها بالرج

4يتم اذابة حبات السبستريت على الرجاج في البفر المعد داخل الزجاجة

5يتم وضع محلول السبستريت في عيون طبق الاليزا

6يتم ترك الطبق بعيدا عن الضوء المباشر لمدة لا تزيد عن ساعة

7يتم اخراج الطبق وتفحصه وكانت العيون شفافة اي لا يوجد اصابات اما العينان التي تراهما بلون اصفر فهي البوزيتيف كونترول

8وهذه نتيجة فحص قديم في بدايات عملنا في الفحص ولاحظ الاصابة العالية حيث ان اللون الاصفر يعني ان العينة مصابة

انتهى بحمد الله

رفع